ПЛР дослідження

1.1.  Загальні правила взяття клінічного матеріалу для дослідження методом ПЛР

·           Взяття крові слід проводити натщесерце або через 3 години після прийому їжі з ліктьової вени одноразовою голкою в спеціальну вакуумну систему Вакутайнер (бузкові кришки - ЕДТА).

·           Матеріал рекомендовано брати безпосередньо із місця локалізації інфекційного процесу (зішкряб епітелію уретри або каналу шийки матки) тільки одноразовими інструментами в одноразові пробірки, бажано в період загострення.

·           Відразу після взяття щільно закривати пробірки, флакони з клінічним матеріалом, не торкаючись їх внутрішньої поверхні і внутрішньої поверхні кришки. Контейнери для біоматеріалу (мокротиння, слина, сеча, сперма та ін.) після закриття поміщуються до індивідуальних пакетів з зіп-застібкою.

·           Для контролю ефективності терапії взяття біоматеріалу проводиться не раніше, ніж через 4-6 тижнів після закінчення лікування.

·           Діагностика методом ПЛР вірусних гепатитів проводиться взяттям крові з вени.

·           Перед здачею біоматеріалу з урогенітального тракту НЕ БАЖАНО:

Ø   жити статевим життям менш ніж за 36 годин до взяття матеріалу;

Ø   застосовувати дезінфікуючі розчини, використовувати антибактеріальне мило;

Ø   застосовувати антибактеріальні засоби або септики всередину;

Ø   жінкам застосовувати будь-які вагінальні свічки менше ніж за 36 годин до взяття матеріалу;

Ø   жінкам спринцюватися;

Ø   перед здачею біоматеріалу з урогенітального тракту бажано утриматись від сечовиділення за 1-1,5 для жінок та  3-4 для чоловіків до взяття матеріалу.

1.2.  Взяття крові для дослідження методом ПЛР

Взяття крові слід проводити натщесерце або через 3 години після прийому їжі з ліктьової вени одноразовою голкою в спеціальну вакуумну систему (бузкові кришки - ЕДТА). Після взяття крові пробірку слід кілька разів плавно перевернути догори дном, щоб кров у пробірці поступово перемішалася з антикоагулянтом (!!! Інакше кров згорнеться і виділення ДНК/РНК стане неможливим!). Після плавного перемішування пробірку помістити в штатив.

1.3.  Взяття біологічного матеріалу з урогенітального тракту для дослідження методом ПЛР

З метою отримання об'єктивного результату необхідно, щоб досліджуваний матеріал містив якомога більшу кількість епітеліальних клітин і мінімальну кількість слизу та домішок крові. Неправильне взяття біологічного матеріалу може призвести до неможливості отримання достовірного результату і, внаслідок цього, необхідності повторного взяття біологічного матеріалу.

Перед взяттям матеріалу із уретри пацієнтам необхідно утриматись від сечовиділення: 1-1,5 години для жінок,  3-4 годин для чоловіків.

Забір біологічного матеріалу здійснюють в пробірку типу «Еппендорф» 1,5 мл з транспортним середовищем.

·           Урогенітальний тракт жінки.

Для скринінгових досліджень методом ПЛР забір матеріалу слід проводити із трьох точок різними зондами:

ü        цервікальний канал, задній звід піхви, уретра - в одну пробірку, по черзі обполіскуючи кожен зонд. 

При необхідності беруть матеріал з ерозивно-виразкових уражень. Відокремлюване забирають в невеликій кількості. Присутність домішок (слиз, кров, гній) неприпустима, тому що призводить до деградації досліджуваних мікроорганізмів.

Епітелій цервікального каналу (ендоцервікс)

Забір матеріалу проводити за допомогою цервікальної цитощітки або універсального зонда в пробірку зі спеціальним транспортним середовищем. Епітелій слід забирати в достатній кількості.

Видалити слиз із поверхні шийки матки гінекологічним шпателем або зондом (після чого зонд або шпатель викидають).

Ввести зонд в цервікальний канал на 1-1,5 см і обертати його протягом 3-5 сек.

Витягнути зонд, уникаючи торкання стінок піхви, і помістити його в стерильну одноразову пробірку з транспортним середовищем.

Занурити робочу частину зонда в транспортне середовище, обертати зонд протягом 10-15 сек., уникаючи розбризкування розчину.

Вийняти зонд із розчину, притискаючи його до стінки пробірки. Віджати надлишок рідини, видалити зонд і закрити пробірку.

Епітелій заднього склепіння піхви

У випадку надлишку слизу і рясних виділень видалити їх гінекологічним шпателем або зондом (після чого їх викидають).

Провести зондом по поверхні слизової в області заднього склепіння піхви та екзоцервіксу і перенести зонд в пробірку з транспортним середовищем.

Зануривши робочу частину зонда в транспортне середовище, обертати зонд протягом 10-15 сек. уникаючи розбризкування розчину.

Вийняти зонд із розчину, притискаючи його до стінки пробірки. Віджати надлишок рідини, видалити зонд і закрити пробірку.

Епітелій уретри

Перед взяттям зішкрябу з уретри обробити її зовнішній отвір сухим стерильним зондом. Ввести зонд в уретру на глибину 1-1,5 см і акуратно, не поранивши слизову, кількома обертальними рухами отримати зішкряб епітеліальних клітин.

Помістити зонд в пробірку типу «Еппендорф» з транспортним середовищем.

Занурити робочу частину зонда в транспортне середовище, обертати зонд протягом 10-15 сек., уникаючи розбризкування розчину.

Видалити зонд з розчину, притискаючи його до стінки пробірки. Віджати надлишок рідини, видалити зонд і закрити пробірку.

·           Урогенітальний тракт чоловіка.

Зішкріб епітеліальних клітин з уретри чоловіків.

Перед взяттям зішкрябу з уретри необхідно утриматися від сечовиділення не менше двох годин.

При наявності вільно стікаючих виділень з уретри видаляти їх сухим тампоном.

Ввести зонд в уретру на глибину 3-4 см., кількома обертальними рухами отримати зішкряб епітеліальних клітин і перенести зонд в пробірку типу «Еппендорф» з транспортним середовищем.

Занурити робочу частину зонда в транспортне середовище, обертати зонд протягом 10-15 сек., уникаючи розбризкування розчину.

Вийняти зонд з розчину, притискаючи його до стінки пробірки. Віджати надлишок рідини, видалити зонд і закрити пробірку.

Присутність домішок (слиз, кров, гній) неприпустима, оскільки це призводить до деградації досліджуваних мікроорганізмів.

1.4.  Секрет передміхурової залози

Секрет простати слід збирати після попереднього масажу простати через пряму кишку.

Після закінчення масажу передміхурової залози її секрет у кількості 0,5-1 мл слід зібрати в одноразову стерильну суху пробірку типу «Еппендорф» об’ємом 1,5-2,0 мл.

Пробірку щільно закрити кришкою, не допускаючи зазору та зминання внутрішньої частини кришки.

При неможливості отримати секрет, відразу після масажу простати слід зібрати першу порцію сечі (у якій міститься секрет передміхурової залози) в кількості 20-30 мл (див. правила забору сечі).

1.5.  Сперма

Забір матеріалу здійснюється в стерильний контейнер (після гігієни зовнішніх статевих органів).

Зверніть увагу на те, щоб кришка контейнера була добре закрита (для уникнення витікання матеріалу).

1.6.  Сеча

Для аналізу відбирають першу порцію ранкової сечі в кількості 20-30 мл в спеціальний контейнер для сечі (після гігієни зовнішніх статевих органів).

1.7.  Слина

Провести ретельну гігієну порожнини рота (почистити зуби, прополоскати рот водою до повного видалення зубної пасти), через 30 хвилин можна починати збір слини (в кількості не менше 1,0 мл) в сухі стерильні одноразові пробірки типу “Еппендорф”. Ємність щільно закрити кришкою та промаркувати. Забір слини можна робити протягом дня.