ПЦР исследования

1.1. Общие правила взятия клинического материала для исследования методом ПЦР 

• Взятие крови следует проводить натощак или через 3 часа после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой в специальную вакуумную систему «Вакутайнер» (сиреневые крышки - ЭДТА).          

• Материал рекомендуется изымать непосредственно из места локализации инфекционного процесса (соскоб эпителия уретры или канала шейки матки) только одноразовыми инструментами в одноразовые пробирки, желательно в период обострения.          

• Сразу после взятия плотно закрыть пробирки, флаконы с клиническим материалом, не касаясь их внутренней поверхности и внутренней поверхности крышки. Контейнеры для биоматериала (мокрота, слюна, моча, сперма и др.) после закрытия помещаются в индивидуальные пакеты с зип-застежкой.          

• Для контроля эффективности терапии взятие биоматериала проводится не ранее, чем через 4-6 недель после окончания лечения.          

• Диагностика методом ПЦР вирусных гепатитов проводится взятием крови из вены.          

• Перед сдачей биоматериала из урогенитального тракта НЕ ЖЕЛАТЕЛЬНО:          

Ø жить половой жизнью менее чем за 36 часов до взятия материала;  

Ø применять дезинфицирующие растворы, использовать антибактериальное мыло;  

Ø применять антибактериальные средства или септики внутрь;  

Ø женщинам применять любые вагинальные свечи менее чем за 36 часов до взятия материала;  

Ø женщинам спринцеваться;  

Ø перед сдачей биоматериала из урогенитального тракта желательно воздержаться от мочеиспускания за 1-1,5 для женщин и 3-4 для мужчин до взятия материала.    

1.2. Взятие крови для исследования методом ПЦР 

Взятие крови следует проводить натощак или через 3:00 после приема пищи из локтевой вены одноразовой иглой в специальную вакуумную систему (сиреневые крышки - ЭДТА). После взятия крови пробирку следует несколько раз плавно перевернуть вверх дном, чтобы кровь в пробирке постепенно перемешалась с антикоагулянтом (иначе кровь свернется и выделение ДНК / РНК станет невозможным!). После плавного перемешивания пробирку поместить в штатив.

1.3. Взятие биологического материала из урогенитального тракта для исследования методом ПЦР 

С целью получения объективного результата необходимо, чтобы исследуемый материал содержал как можно большее количество эпителиальных клеток и минимальное количество слизи и примеси крови. Неправильное взятие биологического материала может привести к невозможности получения достоверного результата и, вследствие этого, необходимости повторного взятия биологического материала.

Перед взятием материала из уретры пациентам необходимо воздержаться от мочеиспускания: 1-1,5 часа для женщин, 3-4 часов для мужчин. 

Забор биологического материала осуществляют в пробирку типа «Эппендорф» 1,5 мл с транспортной средой.

• Урогенитальный тракт женщины        

Для скрининговых исследований методом ПЦР забор материала следует проводить из трех точек различными зондами:

 цервикальный канал, задний свод влагалища, уретра - в одну пробирку, поочередно ополаскивая каждый зонд.         

При необходимости берут материал из эрозивно-язвенных поражений. Отделяемое забирают в небольшом количестве. Присутствие примесей (слизь, кровь, гной) недопустимо, так как приводит к деградации исследуемых микроорганизмов.

Эпителий цервикального канала (эндоцервикса)

Забор материала проводить с помощью цервикальной цитощеткы или универсального зонда в пробирку со специальным транспортным средой. Эпителий следует забирать в достаточном количестве.

Удалить слизь с поверхности шейки матки гинекологическим шпателем или зондом (после чего зонд или шпатель выбрасывают).

Ввести зонд в цервикальный канал на 1 1,5 см и вращать его в течение 3-5 сек.

Вытянуть зонд, избегая касания стенок влагалища, и поместить его в стерильную одноразовую пробирку с транспортной средой.

Погрузить рабочую часть зонда в транспортную среду, вращать зонд в течение 10-15 сек., Избегая разбрызгивания раствора.

Вынуть зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки. Отжать избыток жидкости, удалить зонд и закрыть пробирку.

Эпителий заднего свода влагалища

В случае избытка слизи и обильных выделений удалить их гинекологическим шпателем или зондом (после чего их выбрасывают).

Провести зондом по поверхности слизистой в области заднего свода влагалища и экзоцервикса и перенести зонд в пробирку с транспортной средой.

Погрузив рабочую часть зонда в транспортную среду, вращать зонд в течение 10-15 сек. избегая разбрызгивания раствора.

Вынуть зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки. Отжать избыток жидкости, удалить зонд и закрыть пробирку.

Эпителий уретры

Перед взятием соскоб из уретры обработать ее наружное отверстие сухим стерильным зондом. Ввести зонд в уретру на глубину 1- 1,5 см и аккуратно, не поранив слизистую, несколькими вращательными движениями получить соскоб эпителиальных клеток.

Поместить зонд в пробирку типа «Эппендорф» с транспортной средой.

Погрузить рабочую часть зонда в транспортную среду, вращать зонд в течение 10-15 сек., избегая разбрызгивания раствора.

Удалить зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки. Отжать избыток жидкости, удалить зонд и закрыть пробирку.

• Урогенитальный тракт мужчины          

Соскоб эпителиальных клеток из уретры мужчин

Перед взятием соскоба из уретры необходимо воздержаться от мочеиспускания не менее двух часов.

При наличии свободно стекающих выделений из уретры удалять их сухим тампоном.

Ввести зонд в уретру на глубину 3 4 см., Несколькими вращательными движениями получить соскоб эпителиальных клеток и перенести зонд в пробирку типа «Эппендорф» с транспортной средой.

Погрузить рабочую часть зонда в транспортную среду, вращать зонд в течение 10-15 сек., избегая разбрызгивания раствора.

Вынуть зонд из раствора, прижимая его к стенке пробирки. Отжать избыток жидкости, удалить зонд и закрыть пробирку.

Присутствие примесей (слизь, кровь, гной) недопустима, поскольку это приводит к деградации исследуемых микроорганизмов.

1.4. Секрет предстательной железы 

Секрет простаты следует собирать после предварительного массажа простаты через прямую кишку.

После окончания массажа предстательной железы ее секрет в количестве 0,5-1 мл следует собрать в одноразовую стерильную сухую пробирку типа «Эппендорф» объемом 1,5-2,0 мл.

Пробирку плотно закрыть крышкой, не допуская зазора и смятия внутренней части крышки.

При невозможности получить секрет, сразу после массажа простаты следует собрать первую порцию мочи (в которой содержится секрет предстательной железы) в количестве 20-30 мл (см. Правила забора мочи).

1.5. Сперма 

Забор материала осуществляется в стерильный контейнер (после гигиены наружных половых органов).

Обратите внимание на то, чтобы крышка контейнера была хорошо закрыта (для избежания утечки материала).

1.6. Моча 

Для анализа отбирают первую порцию утренней мочи в количестве 20-30 мл в специальный контейнер для мочи (после гигиены наружных половых органов).

1.7. Слюна 

Провести тщательную гигиену полости рта (почистить зубы, прополоскать рот водой до полного удаления зубной пасты), через 30 минут можно начинать сбор слюны (в количестве не менее 1,0 мл) в сухие стерильные одноразовые пробирки типа "Эппендорф". Емкость плотно закрыть крышкой и промаркировать. Забор слюны можно делать в течение дня.